Immunofluorescenza diretta

Cosa è diretto immunofluorescenza?

L'immunofluorescenza diretta (DIF) è una tecnica utilizzata in laboratorio per diagnosticare malattie della pelle, dei reni e di altri sistemi di organi. Chiamato anche test immunofluorescente diretto o primario immunofluorescenza.

DIF implica l'applicazione di anticorpo–fluoroforo coniugare molecole a campioni di tessuto del paziente ottenuti da biopsie. Questi anticorpi-fluoroforo coniugati bersaglio anormale movimenti intestinali di proteina nel tessuto del paziente. Quando esposto alla luce, il fluoroforo emette la propria frequenza di luce, vista con a microscopio. Il particolare pattern di colorazione e il tipo di anomalia proteina dichiarazione che si vedono nel campione di tessuto aiutano a diagnosticare la malattia.

Immunofluorescenza diretta per la diagnosi delle malattie della pelle

DIF è utile nella diagnosi di sospetto autoimmune patologia, tessuto connettivo malattie e vasculite. I modelli di colorazione osservati nei campioni di tessuto possono essere specifici di un'entità della malattia o potrebbe essere necessario interpretarli con la clinica e istologico raccomandazioni.

Autoimmune chiassoso malattie

DIF è utile per diagnosticare le seguenti malattie bollose autoimmuni:

• Pemfigo volgare
• Pemfigo foliaceo
• Paraneoplastico pemfigo
• Immunoglobuline (Ig) Un pemfigo
• Pemfigoide bolloso
• Pemfigoide gestazionale
• Mucoso pemfigoide di membranacicatrici pemfigoide)
• Epidermolisi bollosa acquisita
• Bolloso sistemico lupus eritematoso (LES)
• Lineare Malattia da IgA bollose
• Dermatite erpetiforme.

Malattie del tessuto connettivo

DIF è utile per diagnosticare le seguenti malattie del tessuto connettivo:

• Lupus eritematoso sistemico, discoidalee subacuto cutaneo forme)
• Neonatale lupus eritematoso
• Sistemico sclerosi
• Malattia del tessuto connettivo misto
• Dermatomiosite.

Vasculite e altre condizioni

DIF è utile per diagnosticare la vasculite cutanea e alcuni altri tipi di infiammatorio Malattia della pelle:

• Piccola barca (ipersensibilità) vasculite
• Henoch - Schönlein viola
• Lichen planus
• Porfiria tardivo cutaneo
• Alcune reazioni avverse della pelle ai farmaci
• Fotosensibilità eruzioni

Sito di biopsia

Il sito ottimale per eseguire una biopsia cutanea dipende dalla malattia sospetta.

• Malattie bollose autoimmuni: assume un aspetto normale perilesionale pelle entro 1 cm da a bulla. Poiché i risultati falsi negativi possono derivare da campioni degli arti inferiori, evitare questi siti se possibile.
• Malattie del tessuto connettivo: la biopsia dovrebbe essere prelevata da a lesione (spesso in zone esposte al sole), idealmente più vecchio di 6 mesi ma ancora attivo. Un campione aggiuntivo viene spesso prelevato in un luogo protetto dal sole.
• Vasculite: Per ottenere i migliori risultati, prendi un file biopsia della puntura o un profondobiopsia da barba da un infortunio che ha meno di 24 ore.

Di solito viene eseguita un'altra biopsia di routine con ematossilina-eosina (H&E). istologia. Si noti che il sito di biopsia ottimale e il periodo di tempo richiesto differiscono per questi esempi.

• Malattie bollose autoimmuni: elimina a vescicola o biopsia dell'orlo di una bolla.
• Vasculite: seleziona un purpurica infortunio di durata inferiore a 72 ore.

Trasporto e conservazione del campione bioptico

I campioni per DIF non devono essere inseriti in formalina, poiché ciò altera le proteine e riduce significativamente la precisione dei risultati. Trasportare il campione al laboratorio il prima possibile. Le opzioni per il trasporto del campione includono:

• Collocato in un soluzione salinagarza imbevuta
• In soluzione salina soluzione
• In media speciali (ad esempio, Michel o Zeus media)
• Congelato in azoto liquido (il campione non deve essere lasciato scongelare).

Ogni laboratorio ha i propri protocolli. I campioni in soluzione salina possono produrre più alto sensibilità rispetto ad altri supporti se elaborato entro 24-48 ore.

Cosa succede al campione in laboratorio?

DIF può essere eseguito su una macchina automatizzata o manualmente. Il processo prevede prima la realizzazione di sezioni congelate e poi l'immunofluorescenza.

Prepara le sezioni congelate

1. Una biopsia con ago viene trasportata al laboratorio su una garza imbevuta di soluzione salina.
2. Il campione viene posto in un file gel.
3. L'azoto liquido viene utilizzato per congelare il campione e il gel.
4. Il campione congelato è contenuto nel gel congelato.
5. Il campione può essere conservato in azoto liquido per circa una settimana.
6. Vengono tagliate fette di 4-6 micron di spessore.

Esecuzione di immunofluorescenza diretta

1. Vengono realizzate cinque o sei diapositive; ognuno per un diverso reagente. Verrà utilizzato un vetrino per la normale colorazione H&E.
2. Una penna speciale viene utilizzata per disegnare un perimetro da mantenere reagenti all'interno delle diapositive.
3. Le diapositive vengono lavate.
4. I reagenti sono composti.
5. I reagenti (coniugati anticorpo-fluoroforo a IgG, IgM, IgA, complemento Proteina C3 e quando necessario fibrinogeno) vengono fatti cadere sulle diapositive e le diapositive vengono lasciate per qualche tempo al buio.
6. I vetrini vengono nuovamente lavati in soluzione.
7. Le coperture di vetro sono posizionate sulle diapositive.

Interpretazione dell'immunofluorescenza diretta

I vetrini di immunofluorescenza preparati vengono esaminati da a patologo per determinare i siti di deposizione immunitaria primaria (se presenti), classi di immunoglobuline o altre deposizioni immunitarie e modelli di deposizione. I modelli di colorazione possono essere classificati in cinque gruppi:

• Intercellulare pattern di colorazione superficiale (ICS)
• Lineare membrana basale zona (BMZ)
• Granulare Modello BMZ
• Modello BMZ shaggy
• Vascolare e altri modelli.

Esempi di modelli di colorazione

• Schema di colorazione dello spazio intercellulare (filo di pollo), pemfigo volgare.
• Schema di colorazione dello spazio intercellulare (filo di pollo), pemfigo foliaceo.
• Deposizione lineare di IgG nell'area della membrana basale, pemfigoide bolloso.
• Deposizione lineare di IgA nell'area della membrana basale, IgA bollosa lineare Malattia della pelle.
• Modello di colorazione vascolare in dermico Vasi IgM.
• Deposizione granulare di C3 nell'area della membrana basale

Schemi di colorazione di specifiche malattie della pelle

Pemfigo volgare

• Standard ICS IgG (90-100%) o C3

Pemfigo foliaceo

• Standard ICS IgG o C3

Pemfigo paraneoplastico

• Modello ICS debole
• BMZ IgG lineare o granulare o C3
• A volte, lichenoide modificare

Pemfigo IgA

• ICS con IgA

Pemfigoide bolloso

• BMZ lineare con IgG e BMZ lineare con C3

Membrana mucosa pemfigoide (cicatrice pemfigoide)

• BMZ lineare con IgG, C3 e IgA

Epidermolisi bollosa acquisita

• BMZ lineare IgG e C3
• A volte BMZ IgA o IgM lineari

Dermatite erpetiforme

• BMZ granulare con IgA
• A volte BMZ C3 granulare
• Raramente, BMZ IgG e M3 granulari

Lupus eritematoso

• Lupus eritematoso sistemico
  • BMZ granulare IgG, IgM, IgA, C3
  • Screziato epidermico core Pattern IgG (10-15%)
• Lupus eritematoso discoide
  • BMZ Granulare IgG, IgM
  • Corpi citoidi IgM e IgA
• Lupus eritematoso cutaneo subacuto
  • BMZ granulare IgG, IgM, C3
  • Epidermico intracitoplasmatica Deposizione di particelle IgG
  • Corpi citoidi IgM, IgA

Sclerosi sistemica

• IgM granulari BMZ
• Deposizione di nuclei epidermici maculati (20%)

Malattia del tessuto connettivo misto

• BMZ granulare (15%)
• Pattern dei nuclei epidermici macchiati di IgG (46-100%)

Dermatomiosite

• IgM granulari, IgG, C3
• Corpi citoidi IgM, IgA

Reazioni lichenoidi (lichen planus, reazioni ai farmaci e fotodermatosi)

• Shaggy BMZ Standard per fibrinogeno
• Corpi citoidi IgM, IgA

Porfiria cutanea tardiva

• Vasi dermici: colorazione continua densa IgG, IgA, C3
• BMZ C3 granulare, IgM
• BMZ lineare IgG, IgA

Vasculite

• Forti vasi dermici IgM, IgG, C3, fibrinogeno

Porpora di Henoch-Schönlein

• Forti vasi dermici IgA

Quanto sono affidabili i risultati dell'immunofluorescenza diretta?

Il test DIF è moderatamente sensibile nel rilevare una varietà di malattie. La sensibilità per DIF si avvicina a 100% per il gruppo di malattie del pemfigo e la sensibilità è stata segnalata tra 55 e 96% per il pemfigoide bolloso. Uno studio su dieci pazienti con porpora di Henoch-Schönlein e nove con lupus eritematoso ha dimostrato test DIF positivi in tutti i pazienti.

Il numero di risultati falsi negativi con DIF dipende dalla qualità del campione, dall'elaborazione di laboratorio e dal fatto che il paziente abbia ricevuto o meno il trattamento. I motivi per risultati falsi negativi includono:

• Un sito di biopsia errato
• Mancanza di epidermide nelle biopsie e altri errori tecnici
• Conservazione prolungata del campione prima del suo trasporto al laboratorio.
• Photobleaching e altri errori di laboratorio
• Il paziente è in trattamento immunomodulante attivo.