directe immunofluorescentie

Wat is direct immunofluorescentie?

Directe immunofluorescentie (DIF) is een techniek die in het laboratorium wordt gebruikt om ziekten van de huid, nieren en andere orgaansystemen te diagnosticeren. Ook wel directe immuun-fluorescerende test of primair immunofluorescentie.

DIF omvat de toepassing van antilichaam–fluorofoor conjugeren moleculen naar weefselmonsters van patiënten verkregen van biopsieën. Deze antilichamen-fluorofoor conjugeren abnormaal doelwit afzettingen van eiwitten in het weefsel van de patiënt. Bij blootstelling aan licht zendt de fluorofoor zijn eigen lichtfrequentie uit, bekeken met a microscoop. Het specifieke kleurpatroon en het type afwijking eiwit uitspraak gezien in het weefselmonster helpen bij het diagnosticeren van de ziekte.

Directe immunofluorescentie voor de diagnose van huidziekten

DIF is nuttig bij de vermoedelijke diagnose auto immuun ziekte, bindweefsel ziekten en vasculitis. Kleurpatronen die in weefselmonsters worden waargenomen, kunnen specifiek zijn voor een ziekte-entiteit of moeten mogelijk worden geïnterpreteerd met klinische en klinische gegevens histologisch aanbevelingen.

auto immuun bulleus ziekten

DIF is nuttig bij het diagnosticeren van de volgende auto-immuunziektes:

• Pemphigus vulgaris
• pemphigus foliaceus
• Paraneoplastisch pemphigus
• immunoglobuline (Ig) Een pemphigus
• bulleuze pemfigoïd
• pemfigoïd tijdens de zwangerschap
• Slijm membraan pemfigoïdcicatricial pemfigoïd)
• Verworven epidermolysis bullosa
• bulleus systemisch lupus erythematosus (SLE)
• Lineair IgA bulleuze ziekte
• Dermatitis herpetiformis.

Bindweefselziekten

DIF is nuttig bij het diagnosticeren van de volgende bindweefselziekten:

• Systemische lupus erythematosus, schijfvormigen subacuut huid vormen)
• neonatale lupus erythematosus
• systemisch sclerose
• Gemengde bindweefselziekte
• Dermatomyositis.

Vasculitis en andere aandoeningen

DIF is nuttig bij het diagnosticeren van cutane vasculitis en sommige andere soorten opruiend Huidziekte:

• kleine boot (overgevoeligheid) vasculitis
• Henoch-Schönlein Purper
• korstmos planus
• porfyrie late huid
• Enkele nadelige huidreacties op medicijnen
• lichtgevoeligheid huiduitslag

Plaats van biopsie

De optimale plaats voor het nemen van een huidbiopsie hangt af van de vermoedelijke ziekte.

• Auto-immuunziektes met blaarvorming: krijgt een normaal uiterlijk rondom de wond huid op minder dan 1 cm van a bulla. Omdat er vals-negatieve resultaten kunnen optreden bij monsters van de onderste ledematen, dient u deze locaties indien mogelijk te vermijden.
• Bindweefselziekten: de biopsie moet worden afgenomen van a blessure (vaak op plekken die blootgesteld zijn aan de zon), idealiter ouder dan 6 maanden maar nog steeds actief. Vaak wordt een aanvullend monster genomen op een plaats beschermd tegen de zon.
• vasculitis: Neem voor het beste resultaat een punch biopsie of een dieptebiopsie scheren van een blessure die minder dan 24 uur oud is.

Meestal wordt er nog een biopsie genomen voor routinematige hematoxyline-eosine (H&E). histologie. Merk op dat de optimale biopsieplaats en de vereiste tijdsperiode voor deze voorbeelden verschillen.

• Auto-immuunziektes met blaarvorming: verwijder een galblaas of biopsie van de rand van een bulla.
• vasculitis: Selecteer een purpurisch letsel dat minder dan 72 uur duurt.

Transport en opslag van het biopsiemonster

Monsters voor DIF mogen niet in formaline worden geplaatst, omdat dit de eiwitten verandert en de nauwkeurigheid van de resultaten aanzienlijk vermindert. Transporteer het monster zo snel mogelijk naar het laboratorium. Opties voor het transporteren van het monster zijn onder meer:

• Geplaatst in een zoutoplossing-doorweekt gaas
• in zoutoplossing oplossing
• Op speciale media (bijvoorbeeld Michel of Zeus media)
• Bevroren in vloeibare stikstof (monster mag niet ontdooien).

Elk laboratorium heeft zijn eigen protocollen. Monsters in een zoutoplossing kunnen produceren hoger gevoeligheid ten opzichte van andere media bij verwerking binnen 24 tot 48 uur.

Wat gebeurt er met het monster in het laboratorium?

DIF kan op een geautomatiseerde machine of handmatig worden uitgevoerd. Het proces omvat eerst het maken van bevroren secties en vervolgens het uitvoeren van immunofluorescentie.

Bereid bevroren secties voor

1. Een naaldbiopsie wordt in zoutoplossing gedrenkt gaas naar het laboratorium vervoerd.
2. Het monster wordt in a geplaatst gel.
3. Vloeibare stikstof wordt gebruikt om het monster en de gel te bevriezen.
4. Het bevroren monster bevindt zich in de bevroren gel.
5. Het monster kan ongeveer een week in vloeibare stikstof worden bewaard.
6. Er worden plakjes van 4-6 micron dik gesneden.

Directe immunofluorescentie uitvoeren

1. Er worden vijf of zes dia's gemaakt; ieder voor een ander reagens. Voor een normale H&E-kleuring wordt een glaasje gebruikt.
2. Er wordt een speciale pen gebruikt om een omtrek te tekenen die behouden moet blijven reagentia binnen de dia's.
3. De objectglaasjes worden gewassen.
4. De reactanten zijn samengesteld.
5. De reagentia (antilichaam-fluorofoor-conjugaten tegen IgG, IgM, IgA, aanvulling C3-eiwit, en wanneer nodig fibrinogeen) worden op de glaasjes gedropt en de glaasjes blijven enige tijd in het donker staan.
6. De objectglaasjes worden opnieuw in oplossing gewassen.
7. Glazen afdekkingen worden over de dia's geplaatst.

Directe immunofluorescentie-interpretatie

De bereide immunofluorescentieglaasjes worden onderzocht door a patholoog om de primaire plaatsen van immuunafzetting (indien aanwezig), klassen van immunoglobuline of andere immuunafzetting en afzettingspatronen te bepalen. Kleurpatronen kunnen in vijf groepen worden ingedeeld:

• Intercellulair oppervlaktekleuringspatroon (ICS)
• Lineair basaal membraan zone (BMZ)-patroon
• Granulair BMZ-patroon
• Shaggy BMZ-patroon
• Vasculair en andere patronen.

Voorbeelden van kleurpatronen

• Kleurpatroon van de intercellulaire ruimte (kippengaas), pemphigus vulgaris.
• Kleurpatroon van de intercellulaire ruimte (kippengaas), pemphigus foliaceus.
• Lineaire IgG-afzetting in de basaalmembraanzone, bulleus pemfigoïd.
• Lineaire IgA-afzetting in de basaalmembraanzone, bulleus lineair IgA huidziekte.
• Vaatkleuringspatroon in dermaal IgM-vaten.
• Granulaire afzetting van C3 in de basaalmembraanzone

Kleurpatronen van specifieke huidziekten

Pemphigus vulgaris

• ICS IgG-standaard (90-100%) of C3

pemphigus foliaceus

• ICS IgG- of C3-patroon

Paraneoplastische pemphigus

• Zwak ICS-patroon
• BMZ IgG lineair of korrelig of C3
• Soms, korstmos wijziging

IgA pemphigus

• ICS met IgA

bulleuze pemfigoïd

• Lineaire BMZ met IgG en lineaire BMZ met C3

slijmvlies pemfigoïd (littekenvorming pemfigoïd)

• Lineaire BMZ met IgG, C3 en IgA

Verworven epidermolysis bullosa

• BMZ lineair IgG en C3
• Soms BMZ lineair IgA of IgM

herpetiforme dermatitis

• granulaire BMZ met IgA
• Soms korrelige BMZ C3
• In zeldzame gevallen granulaire BMZ IgG en M3

Lupus erythematosus

• Systemische lupus erythematosus
  • Granulair BMZ IgG, IgM, IgA, C3
  • Gevlekt epidermaal kernen IgG-standaard (10-15%)
• discoïde lupus erythematosus
  • Granulair BMZ IgG, IgM
  • IgM- en IgA-cytoïdelichamen
• Subacute cutane lupus erythematosus
  • Granulair BMZ IgG, IgM, C3
  • epidermaal intracytoplasmatisch Afzetting van IgG-deeltjes
  • Cytoïde lichaampjes IgM, IgA

systemische sclerose

• BMZ korrelig IgM
• Afzetting van gespikkelde epidermale kernen (20%)

Gemengde bindweefselziekte

• Granulaire BMZ (15%)
• IgG gespikkeld epidermaal kernpatroon (46-100%)

dermatomyositis

• Granulair IgM, IgG, C3
• Cytoïde lichaampjes IgM, IgA

Lichenoïde reacties (lichen planus, medicijnreacties en fotodermatose)

• Shaggy BMZ-patroon voor fibrinogeen
• Cytoïde lichaampjes IgM, IgA

porfyrie cutanea tarda

• Huidvaten: dichte continue kleuring IgG, IgA, C3
• Granulair BMZ C3, IgM
• BMZ lineair IgG, IgA

vasculitis

• Sterke dermale vaten IgM, IgG, C3, fibrinogeen

Henoch-Schönlein purpura

• Sterke IgA-huidvaten

Hoe betrouwbaar zijn directe immunofluorescentieresultaten?

De DIF-test is matig gevoelig bij het detecteren van een verscheidenheid aan ziekten. De gevoeligheid voor DIF benadert 100% voor de pemphigusgroep van ziekten, en er is gerapporteerd dat de gevoeligheid 55 tot 96% is voor bulleus pemfigoïd. Een onderzoek onder tien patiënten met Henoch-Schönlein purpura en negen met lupus erythematosus toonde positieve DIF-tests aan bij alle patiënten.

Het aantal vals-negatieve resultaten met DIF hangt af van de kwaliteit van het monster, de laboratoriumverwerking en of de patiënt wel of niet is behandeld. Redenen voor vals-negatieve resultaten zijn onder meer:

• Een onjuiste biopsieplaats
• Gebrek aan opperhuid in biopsieën en andere technische fouten
• Langdurige opslag van het monster vóór transport naar het laboratorium.
• Fotobleken en andere laboratoriumfouten
• De patiënt krijgt een actieve immuunmodulerende behandeling.