Immunofluorescenza indiretta

Cos'è indiretto immunofluorescenza?

L'immunofluorescenza indiretta, o immunofluorescenza secondaria, è una tecnica utilizzata nei laboratori per rilevare autoanticorpi nel paziente siero. È usato per diagnosticare autoimmune malattie vesciche.

• Senza etichetta primario anticorpi (usato come pennarello per Cancro, diabete e morbo di Alzheimer) dal siero del paziente si legano al bersaglio molecola su campioni di tessuto precedentemente preparati.
• Anticorpi secondari (usati come marker per HIV), coniugare con un colorante fluorescente come la fluoresceina isotiocianato (FITC), si legano al primario anticorpo.
• Quando esposto alla luce, il colorante fluorescente si eccita ed emette una lunghezza d'onda che può essere vista con un fluorescente. microscopio.

Il tessuto substrati usato (o carino esofago o pelle umana) dipenderà dalla malattia sospetta. Diversi modelli di colorazione aiuteranno a diagnosticare una malattia autoimmune. chiassoso patologia.

Per quali condizioni della pelle con vesciche viene eseguito un test di immunofluorescenza indiretta?

L'immunofluorescenza indiretta viene utilizzata per diagnosticare le seguenti malattie bollose autoimmuni:

• Pemfigo volgare
• Pemfigo foliaceo
• Paraneoplastico pemfigo
• Immunoglobuline (Ig) Un pemfigo
• Lineare IgA bollose Malattia della pelle e cronica malattia bollosa dell'infanzia
• Dermatite erpetiforme
• Pemfigoide bolloso
• Pemfigoide gestazionale
• Mucoso pemfigoide di membrana
• Epidermolisi bollosa acquisita
• Bolloso sistemico lupus eritematoso.

Il metodo di laboratorio

Preparazione del siero del paziente per il test

1. 5-10 ml di sangue vengono prelevati e raccolti in una provetta.
2. Il sangue può coagulare.
3. Il campione di sangue viene quindi centrifugato per separare il siero dal coagulo.
4. Il siero viene diviso in parti e congelato fino all'analisi.

Il test di immunofluorescenza indiretta

1. Il tessuto viene tagliato in fette spesse da 4 a 6 micron per il tessuto. substrato diapositive (questo può essere fatto in un laboratorio, oppure le diapositive possono essere ottenute in commercio).
2. Diversi vetrini vengono preparati con diversi substrati di tessuto.
3. Le sezioni di tessuto vengono incubate con siero del paziente per 30 minuti e se viene eseguita una doppia diluizione Titoli sono necessarie.
4. I vetrini vengono lavati per rimuovere gli anticorpi primari non legati.
5. I vetrini vengono incubati per altri 30 minuti con anticorpi secondari contenenti un colorante fluorescente.
6. Ogni diapositiva è montata sotto un vetrino coprioggetto.
7. Ciascun vetrino viene esaminato mediante fluorescenza. microscopia.

Interpretazione dei risultati dell'immunofluorescenza indiretta

I vetrini immunofluorescenti vengono esaminati per la presenza di autoanticorpi attraverso schemi di immunofluorescenza. dichiarazione. I risultati sono soggettivi e l'immunofluorescenza indiretta non può essere utilizzata in modo affidabile per monitorare la gravità e il trattamento della malattia.

I diversi modelli di colorazione osservati con l'immunofluorescenza indiretta includono:

• Intercellulare modello di colorazione spaziale (ICS)
• Membrana basale zona (BMZ) pattern di colorazione.

La sensibilità di uno strumento diagnostico si riferisce alla sua capacità di identificare con precisione le persone con la malattia (cioè produrre un vero risultato positivo). La specificità di uno strumento diagnostico si riferisce alla sua capacità di identificare con precisione coloro che non hanno la malattia (cioè, produrre un vero risultato negativo).

Occasionalmente, un test può anche produrre risultati falsi. Quindi:

• Il risultato può essere negativo anche se il paziente ha la malattia (cioè producono un risultato falso negativo).
• Il risultato può essere positivo in un paziente senza la malattia (cioè produrre un risultato falso positivo).

Modelli immunofluorescenti delle malattie della pelle

Di seguito sono descritti i pattern immunofluorescenti osservati nelle seguenti malattie della pelle.

Pemfigo volgare

Nel pemfigo foliaceo, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Un pattern di colorazione ICS con depositi di IgG o C3
• Una sensibilità da 81 a 87% [4.7]
• Una specificità di 81% [7].

Pemfigo foliaceo

Nel pemfigo foliaceo, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Standard ICS IgG o C3
• 60-86% [4,7].

Pemfigo paraneoplastico

Nel pemfigo, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Anticorpi C3 e IgG
• Una sensibilità dell'80% [3]
• Una specificità di 83% [3].

Pemfigoide bolloso

Nel pemfigoide bolloso, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Un pattern di colorazione lineare di BMZ con depositi di IgG e C3
• Una sensibilità di 70% [3].

Membrana mucosa pemfigoide

Nel pemfigoide delle mucose, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Un pattern di colorazione BMZ con anticorpi IgG o IgA
• Una sensibilità di 20% [3].

Pemfigoide gestazionale

Nel pemfigoide gestazionale, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Serbatoi C3
• Una sensibilità di 93% [3].

Epidermolisi bollosa acquisita

Nell'epidermolisi bollosa acquisita, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Un pattern di colorazione lineare di BMZ con anticorpi IgG
• Una sensibilità di 50% [3].

Dermatite erpetiforme

Nella dermatite erpetiforme, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• Anticorpi IgA anti-endomisio
• Una sensibilità di 80% [3].

Dermatosi bollosa IgA lineare e malattia bollosa cronica dell'infanzia

Nella dermatosi bollosa IgA lineare e nella malattia bollosa cronica dell'infanzia, l'immunofluorescenza indiretta mostra:

• BMZ con anticorpi IgA
• Una sensibilità di 50% [3].

Lupus eritematoso bolloso

Nel lupus eritematoso bolloso sistemico, l'immunofluorescenza indiretta mostra un pattern lineare di BMZ con anticorpi IgG.