Microscopia confocale a riflettanza

Cos'è la riflettanza confocale? microscopia?

In dermatologia, la microscopia a riflettanza confocale (RCM) non lo èinvasivo tecnica di imaging che consente la visualizzazione in vivo di epidermide fino al papillare derma in tempo reale. La risoluzione è quasi paragonabile a quella convenzionale istologia. Ha il vantaggio di consentire al medico di eseguire un "virtuale biopsiaDalla pelle e ottieni indizi diagnostici riducendo al minimo la pelle non necessaria biopsie.

Il confocale microscopio è stato inventato dal professor Marvin Minsky a metà degli anni 1950. L'RCM nell'imaging della pelle è stato successivamente descritto dal Dr. Rajadhyaksha e colleghi nel 1995. Da allora, c'è stato molto interesse nell'uso di questa tecnica nella diagnosi. di neoplasie maligne della pelle come melanoma e in infiammatorio condizioni della pelle.

Come funziona la microscopia a riflettanza confocale?

RCM utilizza il diodo Essere come una sorgente di luce coerente e monocromatica.

• La luce passa attraverso un divisore di raggio, una lente ottica di scansione e focalizzazione e un dispositivo a contatto con la pelle.
• Penetra nella pelle e illumina una piccola porzione di tessuto.
• Luce riflessa da focale Il punto viene riflesso attraverso l'obiettivo, che lo focalizza in un piccolo foro e forma un'immagine su un fotorilevatore.
• Il foro stenopeico consente il passaggio della luce da un solo punto focale (ovvero è confocale) e impedisce la luce da un altro piano sfocato o punto di tessuto.

RCM si basa sulla riflettanza (retrodiffusione) della luce dalle strutture con endogeno contrasto, come melanina, emoglobina e qualcosa organelli. La riflettanza si verifica ai confini di due strutture con diversi indici di rifrazione, come membrane, cheratoialina granuli e melanosomi.

Il Vivascope® 1500 disponibile in commercio utilizza un laser da 830 nm, poiché questa lunghezza d'onda non causa danni ai tessuti del paziente o degli occhi dell'operatore. La profondità di penetrazione è compresa tra 200 e 300 µm, che corrisponde generalmente a derma papillare o più alto reticolare derma.

Come viene utilizzata la microscopia a riflettanza confocale?

L'RCM è una procedura indolore.

• Una piccola quantità di olio da immersione viene applicata sulla pelle (l'indice di rifrazione dell'olio è vicino a quello del strato corneo).
• Una finestra di vetro è attaccata a un anello di metallo e posizionata sopra l'olio.
• La finestra di vetro è fissata alla pelle con nastro adesivo medico per impedire il movimento della pelle.
• Un mezzo di immersione a base d'acqua, ad esempio acqua o a base d'acqua gel, è posto all'interno dell'anello, che è fissato magneticamente all'alloggiamento della lente ottica del microscopio.

RCM consente la scansione orizzontale del tessuto dell'immagine a una profondità preselezionata.

• Ogni immagine di base generata è di 5 mm x 5 mm. Qualunque cosa lesioni È possibile generare immagini fino a 8 mm x 8 mm.
• Le immagini di base sono unite da un computer in un blocco o mosaico.
• Una serie verticale di immagini può essere ottenuta nella stessa posizione orizzontale e viene chiamata pila.
• Un cubo è una pila di blocchi / tessere.

Il dispositivo RCM dispone di un accessorio per dermatoscopio. Questo permette dermoscopico-correlazione della microscopia confocale. Video di capillare anche il flusso sanguigno può essere filmato.

Quali sono le possibili applicazioni cliniche della microscopia confocale a riflettanza?

RCM può essere utilizzato per diagnosticare benigno e il malvagio lesioni cutanee, come:

• Soprattutto il melanoma lentigo maligno
• Basale cellula carcinoma
• Squamoso carcinoma a cellule

RCM può essere utilizzato per monitorare il trattamento, come ad esempio:

• Efficacia di imiquimod in attinico cheratosi
• Valutare i margini chirurgici appropriati ex vivo nella chirurgia di Mohs

Un gruppo di consenso ha stabilito che le migliori indicazioni per l'uso di RCM sono (gennaio 2017):

• Lesioni localizzate alla testa e al collo, danneggiate da cronica esposizione al sole
• Lesioni dermoscopicamente caratterizzate da regressione
• Amelanotico Tumori

L'RCM può essere utilizzato anche per diagnosticare condizioni infiammatorie, come:

• Psoriasi
• Dermatite/eczema
• Infestazioni, ad esempio la scabbia.

Quali caratteristiche si possono vedere sulla pelle normale usando RCM?

Strato corneo

• il mantello cornea È una superficie altamente rifrangente (lucida) circondata da pieghe cutanee visibili (queste sono scure).
• Corneociti sono grandi (10-30 µm), poligonale e senza un visibile nucleo.

Strato granulare

• Cheratinociti a granulare lo strato cellulare ha benedemarcato contorni che formano un motivo a nido d'ape.
• il citoplasma appare bianco e granuloso a causa degli organelli e dei granuli di cheratoialina.

Strato spinoso

• Cheratinociti nel cellule squamose gli strati sono più piccoli (15-25 µm), poligonali, hanno un citoplasma bianco sottile e un ovale scuro core.
• Formano anche un motivo a nido d'ape.

Strato basale

• Le cellule basali sono piccole (7-12 µm), di forma e dimensioni uniformi e appaiono più luminose a causa della presenza di strati di melanina sopra i loro nuclei.
• Melanociti e pigmentato i cheratinociti appaiono come strutture rotonde / ovali solitarie e sono indistinguibili.
• Nei fototipi cutanei da II a IV, i cheratinociti basali formano gruppi di cellule rotonde con cheratinociti altamente rifrattivi e mostrano un aspetto a ciottoli nelle sezioni confocali superiori.

Dermo-epidermico incrocio (DEJ)

• In DEFJ, piccole cellule basali e melanociti formano anelli luminosi che circondano l'oscurità. dermico papille
• All'interno di questi, piccoli anelli di capillari sanguigni con vasi sanguigni Sono visti.
• Questa disposizione è chiamata "confine" papilla".

Derma

• I vasi sanguigni del derma appaiono come strutture tubolari scure che contengono cellule rifrangenti deboli e lucenti.
• Collagene le fibre si presentano come strutture fibrillari allungate e lucide.

Caratteristiche RCM delle lesioni cutanee

Melanoma

Il melanoma precoce è caratterizzato da:

• Alterazione del DEJ, che appiattisce e ingombra
• Contorni papillari scarsamente definiti (papilla "senza bordi")
• Porridge alternato con unicellulare proliferazioni e nidi di atipico celle per formare un modello "non specifico".
• Papille dermiche che vengono sostituite da cellule atipiche.

Le caratteristiche del melanoma più avanzato sono:

• Cellule maligne che occupano l'intera giunzione.
• Cellule sciolte, grandi e lucenti all'interno dell'epidermide
• Cellule grandi e lucenti con nuclei eccentrici scuri nell'epidermide superficiale (pagetoid diffusione)
• Cerebriform nidifica in nodulare melanoma

Melanocitica nevi

• Per lo più è presente un motivo a rete, corrispondente al componente di legame.
• I nidi di attacco si presentano come strutture arrotondate ben delineate, a volte collegate all'epidermide.
• In nevi composti, a grumo Si osserva uno schema che corrisponde ai nidi cutanei superficiali dei melanociti.

Cheratosi benigna

• Una cheratosi benigna è usata per descrivere una lentigo solare, a seborroico cheratosi, cheratosi simile al lichen planus o una combinazione di questi.
• Alla giunzione dermoepidermica, c'è un aumento della densità delle papille dermiche circondate da un luminoso monomorfo strato cellulare.

Credito. Dr. Manu Jain.

Figura 1. Immagine RCM di una cheratosi benigna alla giunzione dermoepidermica intorno al campione polimorfo papille affilate circondate da un bordo lucido monomorfo gabbie (punta di freccia) e una cornea pseudocisti (freccia).

Figura 2. Immagine RCM di un file cheratosi benigna a soprabasale parte dell'epidermide mostra un motivo a ciottoli: cellule rotonde luminose, ravvicinate, di dimensioni e luminosità uniformi, separate da un contorno poligonale meno rifrangente.

Carcinoma delle cellule basali

Le caratteristiche del carcinoma basocellulare (BCC) sono:

• Celle compatte con periferica palizzata.
• il raggruppati le celle sono delimitate da uno spazio scuro
• Sono spesso circondati da vasi sanguigni prominenti.

Carcinoma spinocellulare

Le caratteristiche del carcinoma a cellule squamose (SCC) sono:

• Variabile cheratinociti atipia.
• Schema atipico a nido d'ape e disordine architettonico di grado variabile all'interno dello strato granulare e spinoso
• Vasi sanguigni rotondi che attraversano le papille dermiche perpendicolarmente alla superficie della pelle lucida scala–Corteccia sulla superficie della pelle

Caratteristiche RCM delle malattie infiammatorie

Le malattie infiammatorie possono essere raggruppate in 4 categorie principali.

• Spongiotico dermatite
• Psoriasiforme malattie
• Malattie con modifiche all'interfaccia
• Pigmentario disturbi diversi dai tumori

Psoriasi

Caratteristiche della cronaca targa la psoriasi sono:

• Papilla non delimitata alla giunzione dermoepidermica. Le papille sono circondate da deboli anelli di cheratinociti basali piuttosto che da anelli luminosi.
• Ispessimento epidermico
• Vasi multipli all'interno delle papille senza montatura

Dermatite spongiotica

La dermatite spongiotica è caratterizzata da:

• Intercellulare e intracellulare L'accumulo di liquidi porta ad un aspetto regolare a nido d'ape.
• Spongiotico vescicola appaiono come spazi vuoti scuri tra lo strato granulare e spinoso
• Esocitosi sembra cellule rotonde e lucide inserite tra i cheratinociti, intorno ai vasi sanguigni e allegati strutture e nel derma.

Limitazioni di RCM

Nel microscopio confocale disponibile in commercio, la profondità dell'immagine è compresa tra 200 e 300 µm, che corrisponde al derma papillare. Pertanto, lesioni o processi infiammatori più profondi non possono essere valutati.

Altre limitazioni includono:

• Non è possibile differenziare lo spitzoide benigno lesione melanoma nella maggior parte dei casi.
• Lesioni con abbondante desquamazione possono alterare la visualizzazione della giunzione dermoepidermica.
• Richiede una formazione approfondita per interpretare le immagini.
• Lo strumento può essere ingombrante e difficile da posizionare in piccoli punti concavi, come l'orecchio, la cresta interna.