Que es indirecto inmunofluorescencia?
La inmunofluorescencia indirecta, o inmunofluorescencia secundaria, es una técnica utilizada en los laboratorios para detectar autoanticuerpos en paciente suero. Se usa para diagnosticar autoinmune enfermedades con ampollas.
- Sin etiquetar primario anticuerpos (usado como marcador para cáncer, diabetes y enfermedad de Alzheimer) del suero del paciente se unen al objetivo molécula en muestras de tejido preparadas previamente.
- Anticuerpos secundarios (utilizados como marcador de VIH), conjugado con un tinte fluorescente como el isotiocianato de fluoresceína (FITC), se unen al primario anticuerpo.
- Cuando se expone a la luz, el tinte fluorescente se excita y emite una longitud de onda que se puede ver con un fluorescente. microscopio.
El tejido sustratos usado (ya sea mono esófago o piel humana) dependerá de la sospecha de enfermedad. Diferentes patrones de tinción ayudarán a diagnosticar una enfermedad autoinmune. bulloso enfermedad.
¿Para qué afecciones cutáneas con ampollas se realiza una prueba de inmunofluorescencia indirecta?
La inmunofluorescencia indirecta se utiliza para diagnosticar las siguientes enfermedades ampollosas autoinmunes:
- Pemphigus vulgaris
- Pénfigo foliáceo
- Paraneoplásico pénfigo
- Inmunoglobulina (Ig) Un pénfigo
- Lineal IgA bulloso dermatosis y crónico enfermedad bullosa de la infancia
- Dermatitis herpetiforme
- Penfigoide ampolloso
- Penfigoide gestacional
- Mucoso penfigoide de membrana
- Epidermólisis ampollosa adquirida
- Bulloso sistémico lupus eritematoso.
El método de laboratorio
Preparación del suero del paciente para la prueba
- Se extraen y recolectan de 5 a 10 ml de sangre en un tubo.
- Se deja que la sangre coagule.
- Luego, la muestra de sangre se centrifuga para separar el suero del coágulo.
- El suero se divide en partes y se congela hasta el momento del análisis.
La prueba de inmunofluorescencia indirecta
- El tejido se corta en rodajas de 4 a 6 micrones de grosor para el tejido. sustrato portaobjetos (esto se puede hacer en un laboratorio, o los portaobjetos se pueden obtener comercialmente).
- Se preparan varios portaobjetos con diferentes sustratos de tejido.
- Las secciones de tejido se incuban con suero del paciente durante 30 minutos y se realiza una dilución doble si títulos son requeridos.
- Los portaobjetos se lavan para eliminar los anticuerpos primarios no unidos.
- Los portaobjetos se incuban durante otros 30 minutos con anticuerpos secundarios que contienen un tinte fluorescente.
- Cada portaobjetos está montado debajo de un cubreobjetos.
- Cada portaobjetos se examina mediante fluorescencia. microscopía.
Interpretación de los resultados de la inmunofluorescencia indirecta
Los portaobjetos inmunofluorescentes se examinan para determinar la presencia de autoanticuerpos a través de los patrones de inmunofluorescencia. declaración. Los resultados son subjetivos y la inmunofluorescencia indirecta no se puede utilizar de forma fiable para controlar la gravedad de la enfermedad y su tratamiento.
Los diferentes patrones de tinción observados con inmunofluorescencia indirecta incluyen:
- Intercelular patrón de tinción espacial (ICS)
- Membrana basal zona (BMZ) patrón de tinción.
La sensibilidad de una herramienta de diagnóstico se refiere a su capacidad para identificar con precisión a las personas con la enfermedad (es decir, producir un resultado positivo verdadero). La especificidad de una herramienta de diagnóstico se refiere a su capacidad para identificar con precisión a los que no tienen la enfermedad (es decir, producir un resultado negativo verdadero).
Ocasionalmente, una prueba también puede producir resultados falsos. Por lo tanto:
- El resultado puede ser negativo incluso si el paciente tiene la enfermedad (es decir, produce un resultado falso negativo).
- El resultado puede ser positivo en un paciente sin la enfermedad (es decir, producir un resultado falso positivo).
Patrones inmunofluorescentes de enfermedades de la piel
Los patrones inmunofluorescentes observados en las siguientes enfermedades de la piel se describen a continuación.
Pemphigus vulgaris
En el pénfigo foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Un patrón de tinción de ICS con depósitos de IgG o C3
- Una sensibilidad del 81 al 87% [4,7]
- Una especificidad del 81% [7].
Pemphigus vulgaris
Pénfigo foliáceo
En el pénfigo foliáceo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Patrón de ICS IgG o C3
- 60-86% [4,7].
Pénfigo foliáceo
Pénfigo paraneoplásico
En el pénfigo, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Anticuerpos C3 e IgG
- Una sensibilidad del 80% [3]
- Una especificidad del 83% [3].
Penfigoide ampolloso
En el penfigoide bulloso, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Un patrón de tinción lineal de BMZ con depósitos de IgG y C3
- Una sensibilidad del 70% [3].
Penfigoide ampolloso
Membrana mucosa penfigoide
En el penfigoide de la membrana mucosa, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Un patrón de tinción de BMZ con anticuerpos IgG o IgA
- Una sensibilidad del 20% [3].
Penfigoide gestacional
En el penfigoide gestacional, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Depósitos C3
- Una sensibilidad del 93% [3].
Epidermólisis ampollosa adquirida
En la epidermólisis ampollosa adquirida, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Un patrón de tinción lineal de BMZ con anticuerpos IgG
- Una sensibilidad del 50% [3].
Epidermólisis ampollosa adquirida
Dermatitis herpetiforme
En la dermatitis herpetiforme, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- Anticuerpos anti-endomisio IgA
- Una sensibilidad del 80% [3].
Dermatosis ampollosa por IgA lineal y enfermedad ampollosa crónica de la infancia
En la dermatosis ampollosa por IgA lineal y la enfermedad ampollosa crónica de la infancia, la inmunofluorescencia indirecta muestra:
- BMZ con anticuerpos IgA
- Una sensibilidad del 50% [3].
Lupus eritematoso bulloso
En el lupus eritematoso ampolloso sistémico, la inmunofluorescencia indirecta muestra un patrón lineal de BMZ con anticuerpos IgG.
